凱氏定氮測定人體尿液的總氮含量
尿總氮是血液除去蛋白的其他含氮物質,主要是蛋白的代謝產物,包括尿素、尿酸、肌酐、肌酸、氨基酸和氨等,另外還有含量很少的所謂未鑒定氮,如谷光甘肽和核甘酸的氮等,它們的分子量小,很易從腎臟排出,尿排泄氮類又受飲食中蛋白質量的影響,也與身體的蛋白質分解和合成代謝平衡有關。
常見的檢測方法有:Kjeldahl(凱氏定氮)法、氣相色譜法(GC)、紫外可見光譜法、Nessler試劑法、電導法等,下面介紹凱氏定氮法對尿液中的總氮含量進行測定。
一.人尿總氮檢測:
正常值:<857mmol/24h(<12g/24h)
混合飲食:714-1285.2mmol/24h(10-18g/24h)
低蛋白飲食:357mmol/24h(5g/24h)
高蛋白飲食:1570-1785mmol/24h(22-25g/24h)。
異常結果:(1)升高:腎功能衰竭、尿路梗阻、心力衰竭、消化道出血、嚴重脫水、白血病等。(2)降低:嚴重肝病等。
需要檢查的人群:有發熱、嘔吐、高寒、惡心、容易出血、泌尿功能障礙等癥狀的人。
二.家畜尿總氮檢測:
凱氮的分析結果可以檢查日糧中物質代謝的情況。家畜尿中的氮的存在形式和數量與家畜日糧中蛋白質的質和量有密切關系。
實驗原理
天然有機物(如蛋白質、核酸及氨基酸等)的含氮量用凱氏定氮法來測定。當天然含氮有機物與濃硫酸共熱時,分解出氮、二氧化碳及水。氮轉變出的氨與硫酸化合生成硫酸銨。分解反應進行得很慢,可加入硫酸銅及硫酸鉀或硫酸鈉促進之,其中硫酸銅為催化劑,硫酸鉀或硫酸鈉可提高消化液的沸點。氧化劑過氧化氫也能加速反應。
消化完了后,在凱氏定氮儀中加入強堿堿化消化液,使硫酸銨分解,放出氨。用水蒸汽蒸餾法,將氨蒸入過量標準無機酸溶液中,然后用標準堿溶液進行滴定,準確測定氨量,從而折算出含氮量。以甘氨酸為例,該過程的化學反應如下:
實驗過程
1、樣品制備
移取樣品1mL,加入消化管。加入混合催化劑(0.3gK2SO4、0.02gCuSO4),加入硫酸2ml。
2、消解
將加完樣品和試劑的消化管放置于消解儀上,蓋好排廢罩,設定消解儀參數如表1所示:
表1消解參數設置
3、測試
消解完成后,待消化管冷卻至室溫后取下備用。檢查定氮儀各試劑是否充足,同時做儀器空白,待儀器空白穩定后,可將消解好的樣品上機測試。定氮儀參數設置如表2所示
儀器
VELP凱氏定氮系統分為兩部分:消化系統和蒸餾滴定系統。具有自動化程度高、耗材利用率高、準確度高,節能環保、結構緊湊美觀等優點。
1. **的蒸汽發生器:常壓型
2. **的鈦金屬冷凝:更高的溫度交換效率
3. 聚合材質防濺裝置:耐酸和堿腐蝕
4. 多任務軟件和**連接:7英寸觸摸屏和網絡連接
5. 符合21CFR第11部分:UDK159和UDK169完全符合
6. 比色滴定(UDK159-169):VELP集成滴定儀**免維護(AOAC推薦方法)
7. 操作員的*大**:**防護門,樣本管放置位置,**把手位置均配備**傳感器
